禽呼腸孤抗體檢測(cè)-elisa酶聯(lián)免疫試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

【用途】

用來(lái)檢測(cè)雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體

【試驗(yàn)原理】

禽呼腸孤病毒被認(rèn)為與病毒性關(guān)節(jié)炎、發(fā)育遲緩綜合征、呼吸系統(tǒng)疾病、腸熱病、吸收障礙綜合癥和骨質(zhì)疏松有關(guān)，從未發(fā)病的雞中也可分離到呼腸孤病毒，根據(jù)宿主日齡、毒力和接觸病毒途徑的不同，病毒誘發(fā)疾病的的性質(zhì)、癥狀和嚴(yán)重程度也不同，雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體水平及整個(gè)雞群的免疫狀況可用方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

將滅活的抗原包被在微孔板上，加入稀釋后的血清并孵育。血清中的所有抗REO抗體將與微孔板上的REO抗原結(jié)合并形成REO抗原抗體復(fù)合物，然后洗掉未結(jié)合的物質(zhì)，加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗雞的（結(jié)合物）至微孔板中，結(jié)合物將與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，孵育后洗掉未結(jié)合的結(jié)合物，加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶發(fā)生反應(yīng)形成黃色的物質(zhì)。后，終止反應(yīng)，將顏色固定。顏色的深淺可用酶標(biāo)儀（405-410nm）測(cè)定。

【主要組成成份】

【儲(chǔ)存條件及有效期】

1.2~8℃避光保存，防止冷凍，有效期為12個(gè)月。

2.包被板開(kāi)封后2~8℃避光保存，使用期限為15天。

【適用儀器】

含450nm和630nm波長(zhǎng)酶標(biāo)儀；37℃恒溫設(shè)備；可調(diào)微量移液器。

【樣本要求】

1. 為取得實(shí)驗(yàn)效果，避免使用含疊氮鈉、高血脂、長(zhǎng)菌以及嚴(yán)重溶血的樣品；

2.短期（7天）將進(jìn)行檢測(cè)的血清樣品可存放于2～8℃；如需長(zhǎng)期保存，應(yīng)置于-20℃或以下，避免反復(fù)凍融。

【檢驗(yàn)方法】

1. 洗滌液配制：用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號(hào)液）按1：10稀釋（如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水），充分混勻即為工作洗滌液。

2.樣本稀釋：用樣本稀釋液（5號(hào)液）將待檢血清按1:100稀釋（如5μl血清＋495μl樣本稀釋液），充分混勻。 陰性、陽(yáng)性對(duì)照品不用稀釋，直接加樣。

3.加樣反應(yīng)：每次試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性及空白對(duì)照各1孔（分別加入陰性、陽(yáng)性對(duì)照及樣本稀釋液100μl）。樣本檢測(cè)孔每孔加已稀釋血清樣本100μl。37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作濃度洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘；后一次甩凈，拍干。

4.加酶反應(yīng)：除空白對(duì)照孔外，其余每孔加酶結(jié)合物（1號(hào)液）1滴，37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

5.顯色反應(yīng)：加底物（3號(hào)液）和顯色劑（4號(hào)液）各1滴，混勻，37℃下避光顯色10分鐘。

6.終止反應(yīng)： 加終止液（6號(hào)液）1滴，以空白對(duì)照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm波長(zhǎng)（630nm作為參比波長(zhǎng)）讀取OD值。

【參考值】

1.Cut-off 值 (COV)=陰性對(duì)照平均OD值×2.1 (陰性對(duì)照孔OD值＜0.08時(shí)按0.08計(jì))。

2.有效性判定：

空白對(duì)照孔OD值＜0.05（若大于0.05則實(shí)驗(yàn)無(wú)效）；

陰性對(duì)照孔OD值≤0.10（若大于0.10則實(shí)驗(yàn)無(wú)效）；

陽(yáng)性對(duì)照孔OD值≥0.30（若小于0.30則實(shí)驗(yàn)無(wú)效）。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

樣本OD值≥COV值時(shí)，判為病毒抗體陽(yáng)性；

樣本OD值＜COV值時(shí)，判為病毒抗體陰性。                        

【檢驗(yàn)方法的局限性】本試劑僅適用于檢測(cè)鴨血清。

【禽呼腸孤抗體檢測(cè)-elisa酶聯(lián)免疫試劑盒注意事項(xiàng)】

1.包被板須密封防潮。從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應(yīng)平衡至室溫后，方可開(kāi)封啟用。未使用完的板條應(yīng)即時(shí)放回有干燥劑的自封袋中，4℃密封保存。

2.滴加試劑前應(yīng)將滴瓶輕搖、混勻，首滴棄去；滴加試劑時(shí)瓶身應(yīng)保持豎直。

3.瓶蓋每次使用后要蓋緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號(hào)試劑盒的試劑組份不可混用。

4.孵育時(shí)，推薦使用水浴箱。如無(wú)水浴箱，可取密封濕盒放入37℃溫箱內(nèi)使用。

5.用棄的試劑盒及樣本都應(yīng)按污染物妥善處理。試劑盒內(nèi)終止液有腐蝕性，須小心使用。